摘要：為獲得纖維小體(cellulosome)的基本元件,本試驗以灘羊瘤胃液微生物混合DNA為模板,根據(jù)黃色瘤胃球菌纖維小體的腳手架蛋白ScaC基因序列(GenBank登錄號:JN109634.1)設計特異性引物,擴增纖維小體腳手架蛋白基因,并對其進行克隆、測序及核苷酸和氨基酸序列分析;同時構建腳手架蛋白基因原核表達載體,分析其在大腸桿菌中的表達情況。結果顯示,試驗利用1對引物同時成功克隆獲得2個腳手架蛋白編碼基因,其中一個基因全長867bp,編碼288個氨基酸,命名為ScaC2基因;另一個基因全長870bp,編碼289個氨基酸,命名為ScaC7基因。核苷酸序列分析表明,腳手架蛋白基因ScaC2與ScaC7的核苷酸序列相似性為74.1%,ScaC2基因與黃色瘤胃球菌AGY80P318及ScaC7基因與黃色瘤胃球菌DA640P037ScaC基因核苷酸序列相似性均為99%;氨基酸保守序列分析顯示,ScaC2和ScaC7氨基酸序列均具有典型的腳手架蛋白結構域,含有1個Ⅰ型黏附域和1個Ⅰ型錨定域。蛋白表達分析顯示,ScaC2和ScaC7基因均能在大腸桿菌中實現(xiàn)可溶性表達,表達產(chǎn)物大小約為33ku。本試驗克隆獲得的纖維小體的腳手架蛋白基因ScaC2和ScaC7可為后續(xù)人工纖維小體的構建提供基本材料。