VEGF和Smad7雙基因過表達慢病毒載體的構建
作者：李志然; 馬強; 馬利民 南通大學附屬醫院泌尿外科; 江蘇226001
摘要：目的:構建過表達VEGF和Smad7雙基因的慢病毒載體,為勃起功能障礙基因治療的研究提供有效工具。方法:根據GenBank中基因信息,設計合成VEGF和Smad7引物,采用overlap PCR方法擴增目的基因片段,運用基因重組技術將其克隆至慢病毒表達載體Ubi-MCS-3FLAG-CBh-gcGFP-IRES-puromycin,經酶切、測序對重組質粒進行驗證。將重組質粒和Helper1.0、pHelper2.0輔助質粒共轉染293T細胞,包裝雙基因過表達慢病毒并測試其滴度。結果:經酶切和測序鑒定表明VEGF和Smad7雙基因重組慢病毒載體構建成功,熒光法測定重組慢病毒滴度高(2E+8TU/mL)。VEGF和Smad7重組慢病毒能高效轉染293T細胞,Western blot檢測顯示VEGF和Smad7蛋白在靶細胞中過表達。結論:成功構建了攜帶VEGF和Smad7基因并能正確表達的高滴度的重組慢病毒載體。
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