塞內(nèi)加谷病毒3C蛋白生物信息學(xué)分析及真核質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)
摘要：3C蛋白是塞內(nèi)加谷病毒重要的非結(jié)構(gòu)蛋白之一,在病毒入侵機(jī)制及影響宿主抗病毒天然免疫方面發(fā)揮重要作用。試驗(yàn)應(yīng)用Oligo 7.0和Primer 6.0軟件,用BLAST對(duì)比SVV世界參考株,設(shè)計(jì)一對(duì)特異性引物。以SVV-SN株病毒液抽提RNA為模板,將序列連接pMD19-T載體后測(cè)序,對(duì)正確片段作生物信息學(xué)分析可知SVV 3C可編碼一個(gè)較穩(wěn)定非分泌型蛋白,具有一個(gè)保守“催化三聯(lián)體”。預(yù)測(cè)發(fā)現(xiàn)該蛋白具有16個(gè)磷酸化位點(diǎn),證明其較高活性,預(yù)測(cè)其二級(jí)結(jié)構(gòu)后得到再次證實(shí)。將pMD19-SVV-3C和真核表達(dá)載體pcDNA3.1(+)雙酶切后連接,重組質(zhì)粒經(jīng)鑒定后命名為pcDNA3.1(+)-SVV-3C。將pcDNA3.1(+)-SVV-3C轉(zhuǎn)染到BHK-21細(xì)胞24 h后制樣作Western blotting,成功驗(yàn)證該重組質(zhì)粒可在BHK-21中真核表達(dá)。相比其他同科病毒,當(dāng)前SVV 3C蛋白研究存在空白。文章旨在為進(jìn)一步研究SVV 3C蛋白結(jié)構(gòu)提供理論依據(jù),為后續(xù)探索SVV 3C蛋白對(duì)于宿主作用機(jī)制奠定基礎(chǔ)。
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